Praktikum Biokimia: Penentuan Kadar Hemoglobin (Hb)

LAPORAN PENENTUAN KADAR HB 

Penanggung Jawab : Raafi’ud Darajat

  1. TUJUAN
  1. Mengetahui kadar HB dengan metode sahli
  2. Mengetahui kadar HB dengan metode fotometrik
  1. PRINSIP
  1. Hb diubah menjadi hematin asam kemudian warna yang terjadi dibandingkan secara visual dengan standar pada hemometer.
  2. Darah dicampur dengan larutan drabkin, ferysianida akan mengoksidasi HB menjadi met HB akan berikatan dengan cyanide menjadi cyan met.HB
  1. TINJAUAN PUSTAKA

Hemoglobin merupakan protein yang mengandung zat besi dan memiliki afinitas terhadap oksigen untuk mmebentuk oksihemaglobin didalam eritrosit. Dari mekanisme tersebut dapat berlangsung proses distribusi oksigen dari pulma menuju jaringan (Pearce, 1991). Pada hemoglobin manusia dewasa normal (hemoglobin A), terdapat 2 jenis rantai polipeptida yang dinamakan rantai α dan rantai β. Pada rantai α, masing-masing mengandung141 gugus asam amino, sedangkan pada rantai β masing-masing mengandung 146 rantai asam amino. Sehingga hemoglobin A dinamai α2β2. Akan tetapi tidak semua hemoglobin dalam darah dewasa normal merupakan hemoglobin A, sekitar 2,5% hemoglobin merupakan hemoglobin A2, tempat rantai β diganti oleh rantai δ (α2δ2) (Hanong, 2001). Adanya hemoglobin dalam darah ini menyebabkan eritrosit berwarna merah, karena hemoglobin merupakan penyususn 30% dari total isi eritrosit (Mutshler, 1991).Hemoglobin mempunyai berat molekul penyususn 64.450 dan merupakan suatu molekul yang dibentuk oleh 4 rantai polipeptida, dimana pada tiap polipeptida melekat pada gugus heme.Heme adalah suatu turunan porfirin yang mengandung besi (Fe).Polipeptida ini dinamai secara bersama sebagai bagian dari globin dari molekul hemoglobin. Adapun fungsi dari hemoglobin ini sebagai alat transportasi )2 serta membawa hasil akhir proses respirasi CO2.

Ada beberapa metode pemeriksaan hemoglobin.Diantara metode pemeriksaan hemoglobin yang paling sering digunakan di laboratorium dan yang paling sederhana adalah metode sahli, dan yang lebih canggih adalah metode cyanmethemoglobin (Bachyar, 2002).

Prinsip metode sahli adalah hemoglobin dalam darah oleh HCl menjadi hematin asam, kemudian warna yang terjadi dibandingkan secara visual dengan standar dalam alat tersebut.Metode sahli kurang naik karena tidak semua jenis HB dapat diubah menjadi asam hematin seperti karboksi methemoglobin, sulfathemoglobin.

Metode cyanmethemoglobin

Hemoglobin diubah menjadi cyanmethemoglobin dalam larutan yang berisi larutan kalium ferfisi anida dan kalium sianida. Absorbansi larutan diukur pada panjang gelombang nm atau filter hijau. Larutan drabkin yang dipakai pada cara ini mengubah menjadi cyanmethemoglobin (L. Gandasebrata, 1984).

  1. ALAT DAN BAHAN

Alat :

Hemoglobinometer sahli :  –  standar hemoglobin dengan warna pembanding

–     Tabung HB berskala

–     Aspirator

–     Spatula pipet Pasteur

–     Pipet sahli volume 20 mm 3 (20 mikro liter = 0,02 ml)

Cyamethemoglobin           : – foto meter, tabung reaksi, pipet

Bahan :

Metode sahli : HCl 0,1 N, aquades

Metode cyanmeth : larutan probkin, darah

  1. CARA KERJA
  1. Metode cyanmethemoglobin

5 ml pereaksi probkin

 

+ 20 mikro l (0,02 ml) darah

Campur dengan cara memutar tabung

Diamkan 10 menit

Baca pada foto meter λ 546 nm F 36,8

  1. Metode sahli

5 tetes HCl 0,1 sampai tanda merah

 

Masukkan 20 ml darah menggunakan pipet dan selang sahli

Diamkan 3 menit

 

+ aquades tetes demi tetes, hingga berwarna sesuai standar

Baca kadar HB dengan melihat volume dalam tabung reaksi sahli

  1. HASIL PENGAMATAN

Hasil pemeriksaan kadar HB

Kel ompok

Metode sahli kadar HB

Keterangan

Metode cyanmet kadar HB

Keterangan

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

13,92

9,54

18

16

10,6

22

18

16

16,8

15,4

Tidak normal

Tidak normal

Normal

Normal

Normal

Normal

Tidak normal

Normal

Normal

Normal

15,4

14,09

15,77

12,88

12,61

12,8

10,7

14,7

15,4

15,87

Normal

Normal

Normal

Tidak normal

Tidak normal

Tidak normal

Tidak normal

Normal

Normal

Normal

  1. Table pengamatan
No Sampel Perlakuan Gambar/Hasil Praktikan Keterangan
1.

2.

Pereaksi probkin

Darah

Ambil 5 ml preaksi probkin

Ambil 20 µl (0,02 ml) darah

Campur dengan memutar tabung

Diamkan 10’

Baca pada fotometer λ 546 nm f 36,8

Mengambil 5ml pereaksi probkin

Ambil darah sebanyak 20 µl dengan mikropipet

Tabung diputar supaya darah & pereaksi problin tercampur

Diamkan selama 10 menit

Dibaca pada fotometer panjang gelombang 546 nm f 36,8 hasilnya 12,88

  1. Metode Sahli
No Sampel Perlakuan Hasil Perlakuan Keterangan
1.

2.

HCl

Darah

Masukkan 5 tetes HCl 0,1 N (sampai tanda merah)

Masukkan 20 ml darah menggunakan pipet dan selang sahli

Diamkan 3 menit

Ditambahkan aquades tetes demi tetes hingga warna sesuai standar

Baca kadar HB dengan melihat volume dalam tabung reaksi sahli

Aquades

Masukkan 5 tetes HCl 0,1 N (sampai tanda merah)

Memasukkan  darah sebanyak 20 ml menggunakan pipet dan selang sahli

Diamkan 3 menit

Menambahkan aquades tetes demi tetes hingga warna sesuai standar

Dibaca kadar HB dengan melihat volume dalam tabung reaksi sahli

  1. PEMBAHASAN

Hemoglobin adalah molekul protein dalam sel darah merah yang membawa oksigen dari paru-paru ke jaringan tubuh dan karbon dioksida dari jaringan ke paru-paru.

Pada praktikum kali ini, digunakan 2 metode, metode cyanmethomoglobin dan metode sahli.Metode cyanmethoglobin lebih banyak digunakan dan merupakan metode rujukan.Dalam percobaan ini kami menggunkan darah pria dewasa, dimana darah yang diperlukan untuk percobaan sebanyak 20 mikro liter. Terlebih dahulu ambil 5 ml pereaksi drobkin kemudian untuk percobaan sebanyak 20 mikro liter darah dengan cara memutar tabung reaksi, diamkan selama 10 menit lalu baca dengan fotometer, didapatkan hasil dari percobaan kelompok kami mengukur kadar HB dnegan metode cyan methemoglobin yakni 12,88 (tidak normal).

Selanjutnya metode sahli, metode sahli mengandalkan pembentukan asam hematin yang kemudian diukur kadarnya dengan cara membandingkan warna hasil pengenceran dengan warna standar. Pada langkah-langkah cara kerja menggunakan metode sahli, 5 tetes HCl 0,1 sampai tanda merah (tabung reaksi sahli), tambahkan 20 ml darah dengan cara mengambilnya menggunakan pipet hisap, diamkan selama 3 menit, tambahkan lagi aquades tetes demi tetes hingga berwarna sesuai standar. Penggunaan HCl dipraktikum ini, bertujuan untuk meliliskan eritrosit sehingga Hb yang terdapat dalam eritrosit dapat keluar dan bereaksi dnegan HCl membentuk asam hematin. Dari hasil praktikum penentuan kadar HB menggunakan metode sahli, kelompok kami mendapatkan hasil 16 (normal). Metode sahli membutuhkan ketelitian visualisasi praktikan dalam mmebandingkan warna yang diperoleh dari pengenceran dengan warna standar.

  1. KESIMPULAN

–       Dalam pennetuan kadar HB, metode cyanmethemoglobin lebih akurat dibandingkan metode sahli, disebabkan karena metode sahli membutuhkan ketelitian visualisasi dalam mebandingkan warna yang diperoleh, sedangkan metode cyanmethemoglobin keakuratan lebih bagus, sehingga menjadi metode rujukan.

–       Kadar hemoglobin normal untuk pria adalah 14 – 18, sedangkan kadar hemoglobin normal untuk wanita adalah 12 – 15.

–       Kadar hemoglobin yang tinggi disebabkan karena keadaan hemokonsentrasi akibat dari dehidrasi, sedangkan kadar hemoglobin rendah berkaitan dengan berbagai masalah klinis. Jumlah sel darah merah dan kadar hemoglobin tidak selamanya meningkat atau menurun secara bersamaan.

  1. DAFTAR PUSTAKA

Ganong, W.F. 2001. Fisiologi Kedokteran. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC.

Pearce, C.E. 1991. Anatomi dan Fisiologi Untuk Paramedis. Jakarta: PT. Gramedia Pustaka Utama.

Kee, L.J. 1997. Pengukuran Kadar Hemoglobin.http://widablog.blogspot.com/2011/11/pengukuran-kadar-hemoglobin.html

Bachyar. 2002. Metode Pemeriksaan Hemoglobin. http://www.psychoplogymania.com/2012/o9/metode-pemeriksaan-hemoglobin.html

Tinggalkan Balasan

Please log in using one of these methods to post your comment:

Logo WordPress.com

You are commenting using your WordPress.com account. Logout / Ubah )

Gambar Twitter

You are commenting using your Twitter account. Logout / Ubah )

Foto Facebook

You are commenting using your Facebook account. Logout / Ubah )

Foto Google+

You are commenting using your Google+ account. Logout / Ubah )

Connecting to %s